小C講堂第37講——您最關(guān)心的Matrigel使用常見問題
隨著康寧Matrigel產(chǎn)品的充足供應(yīng)，以及疫情防控的放開，近期我們在微信后臺和400熱線收到了很多小伙伴關(guān)于Matrigel的各類咨詢。為了更有效地幫助大家了解我們的產(chǎn)品，更好地完成相關(guān)實驗，解決實驗中可能出現(xiàn)的問題，今天小C就專門針對Matrigel這款ECM應(yīng)用的金標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品，給大家講一講TA的使用小貼士吧！
Matrigel是什么，里面包含哪些成分？
Matrigel是來源于EHS小鼠肉瘤的基底膜基質(zhì)，其中含有約60%層粘連蛋白、30% IV 膠原和8%的巢蛋白，還含有基底膜聚糖、TGF-?、表皮生長因子、類胰島素生長因子、組織纖溶酶原及其他生長因子。
Matrigel有哪些種類？
康寧Matrigel主要有常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)型（Standard）、高濃度（HC）、無酚紅（Phenol red-free）、生長因子減量型（Growth factor reduced, GFR）和人胚胎干細(xì)胞專用（hESC-qualified）、類器官培養(yǎng)用幾個類別。
標(biāo)準(zhǔn)型Matrigel：濃度范圍大致為8-12mg/ml
高濃度Matrigel：濃度范圍大致為18-22mg/ml
無酚紅Matrigel：不含酚紅，產(chǎn)品完全融化后顏色透明
生長因子減量型Matrigel：Matrigel里包含的生長因子經(jīng)過減量處理
人胚胎干細(xì)胞專用Matrigel：經(jīng)過對hESC培養(yǎng)的測試，可以用于人胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)
類器官培養(yǎng)用Matrigel：每個批次均測量彈性模量，指征了用于類器官實驗所需的基質(zhì)剛度。且經(jīng)驗證可形成穩(wěn)定的“3D圓頂”結(jié)構(gòu)，可用于類器官培養(yǎng)
如何選擇Matrigel？
Matrigel到貨需要注意什么？
首先確認(rèn)是否由干冰運(yùn)輸，到貨時包裝箱中干冰是否足量，查看Matrigel液面是否基本水平，以及瓶身側(cè)壁、瓶口有無Matrigel融化的痕跡，以確保運(yùn)輸質(zhì)量；若發(fā)現(xiàn)問題，請及時拍照記錄，并聯(lián)系經(jīng)銷商反饋。
如何儲存Matrigel？
收到產(chǎn)品并確認(rèn)到貨情況無異常后，請將Matrigel儲存于-20℃冰箱，長期保存可置于-80℃冰箱。切勿將Matrigel儲存于自動除霜的冰箱中。在第一次融化后請分裝保存，應(yīng)避免Matrigel反復(fù)凍融。
Matrigel顏色為什么會有不一樣？
無酚紅Matrigel沒有顏色，完全融化后應(yīng)是透明的；
含酚紅Matrigel顏色可以在明黃色至暗紅色之間變化，這些顏色變化是正?，F(xiàn)象。因為酚紅存在時，在溫度、pH不同的情況下液體會出現(xiàn)顏色的差異。
怎么融化Matrigel？Matrigel融化需要多長時間？
將整瓶Matrigel埋沒在碎冰盒中，再將冰盒置于4℃冰箱中，建議放在冰箱靠后的位置，放置過夜融化。確保碎冰足量。融化后轉(zhuǎn)動瓶子查看Matrigel是否全部融化，確認(rèn)無冰晶或膠塊殘留。我們建議過夜融化，高蛋白濃度的Matrigel可能需要更多的時間。請勿將Matrigel瓶直接放在4℃冰箱中融化，也請勿將冰盒及Matrigel放置在冰箱門上或冰箱靠門的位置。以下圖片可供參考：
融化后Matrigel應(yīng)該是什么樣的？
標(biāo)準(zhǔn)型Matrigel融化后應(yīng)為澄清的液體，無酚紅的為澄清且透明；蛋白濃度越高，融化后液體越粘稠。具體請參考下圖Matrigel融化后的照片，左邊兩瓶是高濃度型，右邊兩瓶是標(biāo)準(zhǔn)型：
如何分裝Matrigel？
建議根據(jù)您一次的使用量做小量分裝，。請注意與Matrigel接觸的所有耗材如槍頭、管子均需事先預(yù)冷，且在冰上無菌操作。分裝后的Matrigel可保存在-20℃或-80℃冰箱。建議保留瓶子的標(biāo)簽或記錄下貨號（Catalog Number）及批次號（LOT number），以便后續(xù)查詢追蹤相關(guān)信息。
Matrigel融化時發(fā)現(xiàn)有凝膠，融化不了是怎么回事？
Matrigel對溫度非常敏感，超過10℃即開始成膠，超過22℃成膠速度會更快。如果到貨情況正常，出現(xiàn)此種現(xiàn)象應(yīng)該是融化操作不規(guī)范或者融化期間環(huán)境溫度升高導(dǎo)致部分凝膠。請一定嚴(yán)格按照融化操作規(guī)范執(zhí)行，確保融化時保持低溫環(huán)境。
如何稀釋Matrigel？
一般可用預(yù)冷的無血清培養(yǎng)基或pH7.4的PBS稀釋。由于批次之間的濃度差異，除354277外，推薦按照特定的工作終濃度稀釋，而不要以比例或稀釋倍數(shù)稀釋。
Matrigel濃度去哪兒查詢？
可以在康寧官網(wǎng)，輸入貨號，選擇quality certificate按鈕。或直接點擊網(wǎng)址：https://www.corning.com/asean/en/products/life-sciences/resource-library.html進(jìn)入質(zhì)檢證書查詢頁面，輸入貨號與批號，點擊查找，獲得相應(yīng)COA文件。該文件中有蛋白濃度的說明；
對于干細(xì)胞專用型Matrigel，COA中不包含濃度說明，僅以稀釋系數(shù)為實驗參照，如需了解具體濃度信息，請聯(lián)系康寧技術(shù)支持。
Matrigel使用濃度？
凝膠濃度：在需要Matrigel凝膠的實驗中，工作濃度需大于3 mg/mL
包被濃度：包被實驗時Matrigel無需成膠，因此包被濃度應(yīng)小于凝膠濃度（即3mg/mL）
工作濃度需要根據(jù)具體的細(xì)胞類型進(jìn)行預(yù)實驗測試。對于侵襲實驗，建議初始濃度設(shè)置在200-300 μg/mL之間，再根據(jù)特定的實驗體系進(jìn)行優(yōu)化
血管生成實驗濃度：請使用大于10 mg/mL的Matrigel產(chǎn)品
體內(nèi)皮下注射實驗濃度：由于是體內(nèi)實驗，為了避免成膠不完全，建議終濃度在4 mg/mL以上
什么是稀釋因子(Dilution Factor)？
對于干細(xì)胞專用型Matrigel，其COA中不包含濃度說明，但是有稀釋因子說明。稀釋因子的數(shù)值也是批次特異性的，每個批次的稀釋因子是根據(jù)蛋白質(zhì)濃度計算的?？梢园凑障♂屢蜃拥臄?shù)值來確定使用的量。比如某一批次的稀釋因子為238 μL，則可將238 μL的hESC-qualified Matrigel原液加入到25ml DMEM/F12中，混勻后可鋪4塊六孔板，每孔使用1ml Matrigel稀釋液進(jìn)行包被。具體實驗步驟可見相應(yīng)COA文件。
使用Matrigel時需要注意哪些方面？
所有接觸Matrigel的試劑耗材產(chǎn)品都需要預(yù)冷，操作過程應(yīng)全程在冰上操作，確保低溫環(huán)境。Matrigel對溫度十分敏感，一旦超過10℃，即開始凝膠。以下圖片可供參考：
如何區(qū)別包被和凝膠？
包被指Matrigel濃度小于成膠濃度（即<3 mg/mL），在細(xì)胞培養(yǎng)器皿表面形成薄薄的蛋白層而不凝成膠凍狀物質(zhì)；凝膠指Matrigel濃度大于等于成膠濃度（即≥3 mg/mL），在細(xì)胞培養(yǎng)器皿表面能夠形成膠凍狀物質(zhì)。
Matrigel凝膠鋪板使用量是多少？
薄膠（Thin Gel）：50μL/cm2，常應(yīng)用于細(xì)胞附著和增殖；厚膠（Thick Gel）：150-200 μL/cm2，常應(yīng)用于3D細(xì)胞培養(yǎng)；各培養(yǎng)器皿的有效培養(yǎng)面積請參考下表：
Matrigel包被后的培養(yǎng)器皿能存放多久？
包被過的培養(yǎng)器皿最好當(dāng)天使用，具體情況取決于實驗?zāi)康?。在需要保存的情況下，Matrigel包被之后的培養(yǎng)器皿可以于37 ℃恒溫箱或4 ℃冰箱中放置最長一周的時間。保存時培養(yǎng)表面需要保持濕潤，請勿將包被工作液從培養(yǎng)器皿中吸出。（稀釋后未用完的Matrigel不建議保留再用）。
凝膠后的Matrigel能否融化后再使用？
Matrigel一旦成膠，是很難完全恢復(fù)的?？梢試L試將Matrigel埋在碎冰中，放入4℃冰箱，24-48小時后觀察能否融化。請注意，對于該處理方式后融化的Matrigel，其性能是無法保證的。
如何從Matrigel中收獲細(xì)胞？
推薦使用康寧Dispase或Cell Recovery Solution 產(chǎn)品。Corning Dispase 相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細(xì)胞懸液，不會損傷細(xì)胞或細(xì)胞表面蛋白。此外，Corning Dispase還可用于組織分離。對于代謝研究和RNA抽提，建議在4℃使用Corning Cell Recovery Solution進(jìn)行非酶反應(yīng)的細(xì)胞收獲，因為Corning Matrigel中含有痕量的RNA，進(jìn)行RNA分析時，應(yīng)設(shè)置僅含有Matrigel（不接種細(xì)胞）的陰性對照組。
侵襲實驗中，Matrigel鋪板幾個小時，為什么不會成膠？
在侵襲實驗中，使用Matrigel的目的是包被小室表面，形成一層基質(zhì)蛋白薄膜來模擬細(xì)胞外基質(zhì)，其使用濃度小于3mg/ml，沒有達(dá)到成膠濃度，是不會成膠的。
文章來源于康寧生命科學(xué)